· poliakrilamidXhel duhet nga monomeri akrilamid, materiali fillestar i polimerizimit, katalizatori dhe e drejta e përzierjes së kripës dhe tamponit së bashku.
· akrilamiddhe bis (n, n '- metilen akrilamid i dyfishtë) është matrica e xhelit të formës monomer.
· Procesi i polimerizimit ngjitës të persulfatit të amonit. Formulimi i zamit kërkon 10% zgjidhje persulfate amoniumi të përgatitur në ujë. Shumica e informacionit treguan një nevojë për përdorim aktiv. Sidoqoftë, zgjidhja 10% mund të vendoset në 4 ℃ për disa javë pa humbje të konsiderueshme të aktivitetit. Bëni deri në 10 ml dhe hidhni poshtë kur zam nuk arrin të grumbullohet.
Këshillë: Përqindja eakrilamidNë sekuencat e zamit dhe ngjitjes së proteinave nuk është e njëjtë. Nëse përdorni Premade Acrylamide: BIS Solution, sigurohuni që të merrni shishen e duhur.
· Temed (n, n, n ', n'- tetramethyl etilenediamine) është një katalizator, në një shishe kafe, e vendosur në frigorifer. Shtoni pak para se të derdhni zam.
· Elektroforeza poliakrilamide e përdorur qelqi në elektroforezë duhet të lahet para dhe pas çdo kohe. Pas elektroforezës, lani me një furçë të butë dhe leckë në ujë të nxehtë me sapun, shpëlajeni me ujë të distiluar dhe qëndroni të thahen.
· Lagështia dhe pluhuri mund të shkaktojnë me polimer të uritur. Para elektroforezës, pastroni pllakën e qelqit me pastrues qelqi dhe fshijeni me një furçë të butë. Lani me ujë të distiluar dhe thajeni plotësisht me një letër të fshirë. Shpëlarja me 70% etanol para se të fshihet me letër ndihmon për të pastruar dhe shpejtuar tharjen. Shtoni në mënyrë të njëpasnjëshme mostra të akrilamidit: bis, ujë, zgjidhje tampon, persulfat amoniumi, temp. Shkundni mirë dhe derdhni menjëherë.
Nuk është e nevojshme të degasoni poliakrilamidin para polimerizimit. (Akrilamidi dikur ishte vendosur në një vakum për të hequr flluskat sepse oksigjeni pengon polimerizimin.)
Këshilla për mostër horizontale të pikës së zamit.
· Vendosni një copë letër të zezë në kutinë e poshtme, sfond i zi për të bërë disa vrimë të mostrës për të parë më qartë.
· Buffer i mbushur me rezervuar zam, pak më shumë se koloidi.
· Nëse buza ka një dritë, ndizni dritat, le të shkëlqejë drita. Vizatoni mostrën në pipetë.
· Përdorimi i pajisjes automatike të tubave.
· Në 10-200 MU 1 pika lëvizëse e lëngshme mund të përdoret në shumicën e pikave në mostër. Për vrimat e mostrave shumë të vogla (më pak se 10 μ1), koka e gjatë e pipetës e përdorur për zam sekuencimi është më i përshtatshëm.
· Pipetting thjesht u zhyt në mostër, duke thithur lëngun që lëviz ngadalë. Mostra mund të duket ngjitëse me glicerinë, dhe pompimi i shpejtë mund të tërheqë flluska ajri në kokën e pipetës.
· Mostrat pas thithjes së kokës së tubave, do të lëvizin kokën e lëngshme butësisht në buzë të tubit ose duke fshirë letrën thith kokë të lëngshme jashtë pikave. Kini kujdes që të mos thithni mostrën.
Vendosni mostrën në vrimën e mostrës
· Pajisja e tubacionit Për të mbajtur pak presion, bëni mostrat paksa të lëvizni kokën e lëngshme të tejmbushur.
· Koka e tubave e futur në tampon, pak më e lartë se vrimat e vendit, ruan presionin pozitiv. Maja e pipetës mund të futet në një vrimë të vogël.
· Ngadalë dhe në mënyrë të qëndrueshme mostrat jashtë. Maja e pipetës vendoset mbi vrimën e mostrës së pikës, dhe mostra do të fundoset në vrimë. Lëreni që kampioni të fundoset për të mbushur vrimën e mostrës në vend që të futeni brenda.
· Sapo rënia e fundit e mostrës me kokë të lëngshme, lëngu do të lëvizë në këmbën e dytë, ngadalë ngrini lëvizjen e lëngshme, lëvizni nga tamponi
Si të bëjmë marrjen e mostrave vertikale të ngjitësit?
· Vrimat e mostrës së pikës vertikale të ngjitjes të formuara midis dy pjesëve të qelqit. Në zam shumë të hollë, koka e pipetës as nuk mund të futet midis dy pllakave të qelqit. Shikoni glicerin! Vendosni kokën e pipetës mbi vrimën e mostrës dhe mostra do të fundoset në vrimë.
· Mostra e pikës Më parë, sigurohuni që të vendosni pikën vertikale të mostrës së mostrës së xhelit acil polipropileni, shpëlarje e pastër. Lani larg akrilamidit të papoluar dhe uji që mund të shfaqet në fund të vrimës së mostrës. Uji mund ta bëjë vrimën e mostrës dukshëm më të vogël. Përdorni një shiringë 25ml ose 50ml dhe një gjilpërë me 18 matës. Hidhni në tampon elektroforezë dhe skuqni me kujdes vrimën e mostrës.
· Mund të jetë e vështirë të shihet vrima e mostrës, por në të njëjtën gjë, pjesa tjetër është e lehtë. Nëse ka vrima të tepërta, tamponi i mostrës mund të testohet me bromofenol blu.
Koha e postimit: Mar-31-2023