· poliakrilamidxhel duhet të përbëhet nga monomeri i akrilamidit, materiali fillestar i polimerizimit, katalizatori dhe përzierja e kripës dhe tamponit së bashku.
· akrilamiddhe BIS (N, N'-metilen akrilamid i dyfishtë) është matricë xheli në formë monomeri.
· persulfati i amonit fillon procesin e polimerizimit të ngjitësit. Formulimi i ngjitësit kërkon tretësirë 10% të persulfatit të amonit të përgatitur në ujë. Shumica e informacionit tregonte nevojën për përdorim aktiv. Megjithatë, tretësira 10% mund të vendoset në 4℃ për disa javë pa humbje të ndjeshme të aktivitetit. Shtoni deri në 10 ml dhe hidheni kur ngjitësi nuk arrin të grumbullohet.
Këshillë: Përqindja eakrilamidNë sekuencimin e ngjitësit dhe ngjitësit të proteinave nuk është i njëjtë. Nëse përdorni tretësirë të parapërgatitur akrilamide:BIS, sigurohuni që të merrni shishen e duhur.
· TEMED (N, N, N', N'-tetrametil etilendiaminë) është një katalizator, në një shishe ngjyrë kafe, të vendosur në frigorifer. Shtoni pak para se të derdhni ngjitësin.
· elektroforeza e poliakrilamidit qelqi i përdorur në elektroforezë duhet të lahet para dhe pas çdo herë. Pas elektroforezës, lajeni me një furçë të butë dhe një leckë në ujë të nxehtë me sapun, shpëlajeni me ujë të distiluar dhe lëreni të thahet.
· lagështia dhe pluhuri që mund të shkaktojë polimeri i zbrazët. Para elektroforezës, pastroni pllakën e qelqit me pastrues qelqi dhe fshijeni me një furçë të butë. Lajeni me ujë të distiluar dhe thajeni plotësisht me një pecetë letre. Shpëlarja me 70% etanol para fshirjes me letër ndihmon në pastrim dhe përshpejton tharjen. Shtoni mostra të akrilamidit në mënyrë të njëpasnjëshme: BIS, ujë, tretësirë tampon, persulfat amoniumi, TEMED. Tundeni mirë dhe derdheni menjëherë.
Nuk është e nevojshme të degazohet poliakrilamidi para polimerizimit. (Akrilamidi më parë vendosej në vakum për të hequr flluskat sepse oksigjeni pengon polimerizimin.)
Maja shembullore e pikës ngjitëse horizontale.
· Vendosni një copë letër të zezë në kutinë e poshtme, me sfond të zi për të bërë disa vrima mostre për të parë më qartë.
· tampon i mbushur me rezervuar ngjitësi, pak mbi koloid.
· nëse skaji ka dritë, ndizni dritat, lëreni dritën koloidale të shkëlqejë. Tërhiqni mostrën në pipetë.
· duke përdorur pajisje automatike pipetimi.
· në 10-200 mu 1 pika lëvizëse e lëngut mund të përdoret në shumicën e pikave në mostër. Për vrima shumë të vogla të mostrës (më pak se 10μ1), koka e gjatë e pipetës e përdorur për ngjitësin e sekuencimit është më e përshtatshme.
· pipetimi sapo i zhytur në mostër, duke thithur lëngun që lëviz ngadalë. Mostra mund të duket ngjitëse me glicerinë dhe pompimi i shpejtë mund të tërheqë flluska ajri në kokën e pipetës.
· Mostrat pasi thithin kokën e pipetës, do ta lëvizin kokën e lëngut butësisht në buzë të tubit ose do të thithin kokën e lëngut nga jashtë pikave. Kini kujdes të mos e thithni mostrën.
Vendosni mostrën në vrimën e mostrës
· Pajisja e pipetimit për të mbajtur pak presion, bën që mostrat të lëvizin pak kokën e lëngut të tejmbushur.
· koka e pipetës e futur në tampon, pak më lart se vrimat e pikës, ruan presionin pozitiv. Maja e pipetës mund të futet në një vrimë të vogël.
· nxirrni mostrat jashtë ngadalë dhe në mënyrë të qëndrueshme. Maja e pipetës vendoset mbi vrimën e pikës së mostrës dhe mostra do të zhytet në vrimë. Lëreni mostrën të zhytet për të mbushur vrimën e mostrës në vend që ta shtyni brenda.
· Pasi pika e fundit e mostrës të bjerë me kokën e lëngshme, lëngu do të lëvizë në këmbën e dytë, ngrijeni ngadalë lëngun duke e lëvizur, duke dalë nga tamponi
Si të bëhet marrja e mostrave vertikale e ngjitësit?
· vrima vertikale të mostrës së ngjitësit të formuara midis dy copave të qelqit. Në ngjitësin shumë të hollë, koka e pipetës nuk mund të futet as midis dy pllakave të qelqit. Kujdes me glicerinën! Vendosni kokën e pipetës mbi vrimën e mostrës dhe mostra do të zhytet në vrimë.
· Para se të vendosni mostrën në pikën vertikale, sigurohuni që vrima e mostrës të shpëlahet plotësisht. Lani akrilamidin e papolimerizuar dhe ujin që mund të shfaqet në fund të vrimës së mostrës. Uji mund ta bëjë vrimën e mostrës dukshëm më të vogël. Përdorni një shiringë 25 ml ose 50 ml dhe një gjilpërë 18-gauge. Hidhni tamponin e elektroforezës dhe shpëlajeni me kujdes vrimën e mostrës.
· Mund të jetë e vështirë të shihet vrima e mostrës, por në të njëjtën kohë, pjesa tjetër është e lehtë. Nëse ka vrima të tepërta, tamponi i mostrës mund të testohet me blu bromofenoli.
Koha e postimit: 31 Mars 2023