· poliakrilamidxhel duhet nga monomeri akrilamid, materiali fillestar i polimerizimit, katalizatori dhe e drejta e kripës dhe përzierjes së tamponit së bashku.
· akrilamiddhe BIS (N, N'- metilen akrilamid i dyfishtë) është matrica e xhelit të formës së monomerit.
· Persulfati i amonit fillon procesin e polimerizimit ngjitës.Formulimi i ngjitësit kërkon zgjidhje 10% të persulfatit të amonit të përgatitur në ujë.Shumica e informacionit treguan nevojën për përdorim aktiv.Megjithatë, zgjidhja 10% mund të vendoset në 4℃ për disa javë pa humbje të konsiderueshme të aktivitetit.Plotësoni deri në 10 ml dhe hidheni kur ngjitësi nuk grumbullohet.
Këshillë: Përqindja eakrilamidnë renditjen e ngjitësit dhe proteinave nuk është e njëjtë.Nëse përdorni zgjidhje të parapërgatitur akrilamid: BIS, sigurohuni që të merrni shishen e duhur.
· TEMED (N, N, N', N'- tetramethyl ethylenediamine) është një katalizator, në një shishe kafe, i vendosur në frigorifer.Shtoni pak para se të derdhni ngjitësin.
· Elektroforeza poliakrilamide qelqi i përdorur në elektroforezë duhet të lahet para dhe pas çdo herë.Pas elektroforezës, lani me një furçë të butë dhe leckë në ujë të nxehtë me sapun, shpëlajeni me ujë të distiluar dhe lëreni të thahet.
· Lagështia dhe pluhuri mund të shkaktojnë me polimer të zbrazët.Para elektroforezës, pastroni pllakën e xhamit me pastrues xhami dhe fshijeni me një furçë të butë.Lani me ujë të distiluar dhe thajeni tërësisht me një pecetë letre.Shpëlarja me etanol 70% përpara fshirjes me letër ndihmon në pastrimin dhe përshpejtimin e tharjes.Shtoni mostrat e akrilamidit në mënyrë të njëpasnjëshme: BIS, ujë, tretësirë buferike, persulfat amonium, TEMED.Tundeni mirë dhe derdhni menjëherë.
Nuk është e nevojshme të degazohet poliakrilamide para polimerizimit.(Akrilamidi vendosej në një vakum për të hequr flluskat sepse oksigjeni pengon polimerizimin.)
Këshilla të mostrës së pikës së ngjitjes horizontale.
· vendosni një copë letre të zezë në kutinë e poshtme, me sfond të zi për të bërë një vrimë të mostrës për të parë më qartë.
· Tampon i mbushur me rezervuar ngjitës, pak mbi koloid.
· nëse buza ka një dritë, ndizni dritat, lëreni dritën të shkëlqejë koloid.Tërhiqeni kampionin në pipetë.
· duke përdorur pajisje automatike të tubimit.
· në 10-200 mu 1 pikë lëvizëse e lëngshme mund të përdoret në shumicën e pikave të mostrës.Për vrimat shumë të vogla të mostrës (më pak se 10μ1), koka e gjatë e pipetës e përdorur për renditjen e ngjitësit është më e përshtatshme.
· pipetimi sapo i zhytur në kampion, duke thithur lëngun që lëviz ngadalë.Mostra mund të duket ngjitëse me glicerinë dhe pompimi i shpejtë mund të tërheqë flluska ajri në kokën e pipetës.
· mostrat pas thithjes së kokës së pipetës, do të lëvizin kokën e lëngut butësisht në buzë të tubit ose do të thithin kokën e lëngut të letrës jashtë pikave.Kini kujdes që të mos thithni kampionin.
Vendoseni kampionin në vrimën e mostrës
· Pajisja me tubacion për të mbajtur një presion të vogël, bën që mostrat të lëvizin pak kokën e lëngshme të tejmbushur.
· koka e pipetës e futur në tampon, pak më e lartë se vrimat e pikave, mban presion pozitiv.Maja e pipetës mund të futet në një vrimë të vogël.
· Ngadalë dhe në mënyrë të qëndrueshme mostrat jashtë.Maja e pipetës vendoset mbi vrimën e mostrës së pikës dhe kampioni do të zhytet në vrimë.Lëreni kampionin të fundoset për të mbushur vrimën e mostrës në vend që të shtyhet brenda.
· Pasi pika e fundit e kampionit me kokë të lëngshme, lëngu do të lëvizë në këmbën e dytë, ngrini ngadalë lëvizjen e lëngut, lëvizni nga buferi
Si të bëhet kampionimi vertikal i ngjitësit?
· Vrimat vertikale të mostrës me pikë ngjitëse të formuara midis dy pjesëve të xhamit.Në ngjitës shumë të hollë, koka e pipetës nuk mund të futet as midis dy pllakave prej xhami.Shikoni glicerinën!Vendoseni kokën e pipetës mbi vrimën e mostrës dhe kampioni do të zhytet në vrimë.
· pikë mostër para, të jetë i sigurt për të vënë pikën vertikale të polypropylene acil xhel mostër vrima është shpëlarë pastër.Lani akrilamidin e papolimerizuar dhe ujin që mund të shfaqet në fund të vrimës së mostrës.Uji mund ta bëjë vrimën e mostrës dukshëm më të vogël.Përdorni një shiringë 25 ml ose 50 ml dhe një gjilpërë 18-gauge.Hidhni buferin e elektroforezës dhe shpëlajeni me kujdes vrimën e mostrës.
· Mund të jetë e vështirë të shihet vrima e mostrës, por në të njëjtën kohë, pjesa tjetër është e lehtë.Nëse ka vrima të tepërta, tamponi i mostrës mund të testohet me bromfenol blu.
Koha e postimit: Mar-31-2023